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總糖含量檢測(cè)試劑盒

總糖含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱：Total sugar content test kit
關(guān)鍵詞：總糖含量檢測(cè)|總糖含量測(cè)定|總糖|總糖含量
貨號(hào)：BC2710
規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃避光保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 無(wú)水葡萄糖，4℃保存；臨用前加 1mL 蒸餾水溶解為 10mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品備用。

產(chǎn)品說(shuō)明：
糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖主要指具有還原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在測(cè)定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖，麥芽糖以及可能部分水解的淀粉。
總糖酸水解為還原糖，還原糖在堿性條件下與 DNS 試劑共熱后被還原成氨基化合物，在堿性溶液中呈桔紅色，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，以此測(cè)定樣品中的總糖含量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品中總糖的提取：
組織：稱取約 0.1g 樣品，加入 1mL 試劑一，1.5mL 蒸餾水，勻漿，沸水浴 30min，加入 1mL
試劑二，混勻，用蒸餾水定容 10mL，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。（注意稀釋，見(jiàn)注意事項(xiàng)）
血清（漿）、液體樣本：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.1mL 試劑一，0.15mL 蒸餾水，勻漿，沸水浴 30min，加入 0.1mL 試劑二，混勻，用蒸餾水定容 1mL，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。（注意稀釋，見(jiàn)注意事項(xiàng)）

二、測(cè)定操作表：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋 1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1mg/mL。
3、加樣表：
試劑（µL） 空白管 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管
蒸餾水      150
樣本               150
標(biāo)準(zhǔn)品                    150
試劑三      150     150   150
混勻，沸水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻室溫
蒸餾水      900     900   900
混勻，在 540nm 下測(cè)定吸光值，并計(jì)算?A 測(cè)=A 測(cè)定管-A 空白管、?A 標(biāo)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
總糖含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以標(biāo)準(zhǔn)管的濃度為x軸，對(duì)應(yīng)的?A標(biāo)為y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將?A測(cè)帶入方程中計(jì)算得x（mg/mL）。
2、按樣本鮮重計(jì)算：
總糖（mg/g 鮮重）=（x×V 樣總）÷W×稀釋倍數(shù)=10×x÷W×稀釋倍數(shù)
3、按血清（漿）、液體體積計(jì)算：
總糖（mg/mL）=（x×V 提）÷V 樣×稀釋倍數(shù)=10×x×稀釋倍數(shù)
V 樣總：樣本體積總體積，10mL；
W：樣本鮮重，g；
V 提：液體或血清樣本總體積，1mL；
V 樣：液體或血清體積，0.1mL。

注意：
1、空白管只需做一管。
2、如果?A 大于 1.2，需要將上清液用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
3、此試劑盒對(duì)于纖維素的分解程度無(wú)法達(dá)到 100%。
注意：低檢測(cè)限為 5mg/g 鮮重。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Extraction of Extracellular Matrix in Static and Dynamic Candida Biofilms Using Cation Exchange Resin and Untargeted Analysis of Matrix Metabolites by Ultra-High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry (UPLC-Q-TOF-MS)》 作者:Wenyue Da?, Jing Shao*?, Qianqian Li, Gaoxiang Shi, Tianming Wang, Daqiang Wu and Changzhong Wang* 期刊:FRONTIERS IN MICROBIOLOGY 影響因子:4.259 PMID:31110494