產品名稱:硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
產品型號:BC0085
產品特點:硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒測定意義:NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
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硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
產品規格:100管/48樣 產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:580
庫存狀態:現貨
關鍵字: 硝酸還原酶檢測試劑盒|NR檢測試劑盒|硝酸還原酶|試劑盒
簡要介紹:
NR廣泛存在于植物中,是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→NO2ˉ+NAD++H2O ;產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測定。
產品詳細描述
產品內容:
誘導劑儲備液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加入2mL提取液溶解,可分裝后-20℃保存,避免反復凍融。
試劑三:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水溶解,可分裝后-20℃保存,避免反復凍融。
試劑五:液體8mL×1瓶,4℃保存。(如出現結晶析出,60 ℃水浴溶解后使用)
試劑六:液體8mL×1瓶,4℃保存。
標準品:NaNO2標準儲備液1mL,10μmol/mL,-20℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋0.2μmol/mL。
誘導劑應用液的配制:用時將誘導劑儲備液用水稀釋10倍,即取10mL誘導劑儲備液加90mL蒸餾水,充分混勻。
產品說明:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品測定的前處理
1、取適量誘導劑于燒杯中,將新鮮標本洗凈,濾紙吸干,放入誘導劑應用液中(淹沒即可),浸泡2h,取出樣本,濾紙吸干后,-20℃冷凍30min,取出樣本,濾紙吸干。(根據需要進行誘導處理)
2、稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液,冰浴研磨,4000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長540nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 加樣孔 | |||
測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 | |
樣本 | 50 | 50 | - | - |
標準溶液 | - | - | 50 | - |
雙蒸水 | - | - | - | 50 |
試劑一 | 180 | 180 | 180 | 180 |
試劑二 | 20 | - | 20 | 20 |
混勻后,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴30min | ||||
試劑三 | 20 | 20 | 20 | 20 |
試劑二 | - | 20 | - | - |
4000g 常溫離心10min,取上清液。 | ||||
上清液 | 80 | 80 | 80 | 80 |
試劑四 | 20 | 20 | 20 | 20 |
試劑五 | 50 | 50 | 50 | 50 |
試劑六 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混勻,顯色20min,520nm下比色,分別記為A測定、A對照、A標準、A空白。計算ΔA=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白
注意:空白管只需測一次。
三、NR活性計算:
(1)按樣本鮮重計算:
單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR(U/g 鮮重)=ΔA÷(ΔA標準÷C標準)×V提取÷W÷T =0.4×ΔA÷ΔA標準÷W。
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR(U/mg prot)==ΔA÷(ΔA標準÷C標準)×V樣品÷(V樣品×Cpr)÷T=0.4×ΔA÷ΔA標準÷Cpr。
V樣品:吸取樣本體積,0.05mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL;T:反應時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;C標準:標準液濃度,0.2μmol/mL。
注意事項:
1、當測定的吸光值大于1.2或者ΔA大于0.8時,建議將上清液稀釋后測定。
2、ΔA測定過?。ㄐ∮?.01),可延長反應時間(水浴時間)。
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《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
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硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
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